Betydningen av prøvetakingsbetingelser for potensielle nye sepsis-markører (cytokiner) hos mennesker

Sepsis (blodforgiftning) med bakterier er fortsatt en alvorlig tilstand med betydelig dødelighet delvis pga. usikre diagnostiske metoder. Moderne sepsisforskning og en lang rekke andre studier på inflammasjon måler en rekke markører inkludert cytokiner, chemokiner og vekstfaktorer som dannes bla. av leukocytter. Flere av disse cytokinene og vekstfaktorene er potensielt nye markører for sepsis hos mennesker. Enkelte cytokiner (interleukin-6 og interleukin-8) brukes allerede i klinikken for å påvise blodforgiftning i enkelte land. Effekt av ulike antikoagulanter som tilsettes blodet under prøvetakingen og lagringsbetingelser for prøven etter prøvetaking (tid, temperatur) er imidlertid ufullstendig undersøkt. Prøvetakingen har sannsynligvis stor betydning for analyseresultatene ettersom cytokinene kan dannes av leukocytter i prøven etter prøvetakingen. Vår gruppe har tidligere undersøkt prøvetakingsbetingelser for komplementaktiveringsprodukter og et sentralt reguleringsprotein, nemlig C1-inhibitor. Vi har utført lignende forsøk mtp. prøvetaking for analyse av en rekke cytokiner, chemokiner og vekstfaktorer hos mennesker. Vi har bla. laget en fullblodsmodell for å studere sepsis-mekanismer hos mennesker der vi brukte antikoagulanten lepirudin som ikke påvirker komplement-systemet (PMID 12176911). Komplement-systemet har stor betydning for aktivering av leukocytter og cytokin-syntesen (PMID 18606453). Nye studier viser også at det er interaksjon mellom komplement-systemet og koagulasjon bla. ved at trombin kan aktivere komplement-systemet. Det er også kjent at ulike fremmede overflater av plast som PVC (og rørveggen i glassrør og prøvetakingsrør), samt overflaten på alginat mikrokapsler (PMID:23103159) kan aktivere komplement og bidra til cytokin-syntese. Koagulasjons-aktivering pga. oppregulering og aktivering av vevstromboplastin (Tissue factor, "TF") kan også økes pga. komplement-aktivering og økt cytokinsyntese og TF mRNA oppreguleres spontant når fullblod inkuberes in vitro i prøverør av plast (PMID: 23402023). Vi har derfor undersøkt betydningen av komplement-systemet og koagulasjon ved ulike prøvetakingsbetingelser for cytokin-analyser. Resultatene viser bla. at koagulasjons-aktiveringen som skjer når prøven koagulerer i et vanlig serumrør øker nivået av cytokiner, chemokiner og vekstfaktorer i serum i betydelig grad sammenlignet med ulike plasmatyper. Det anbefales derfor å benytte EDTA plasma fra prøveglass som settes rett på is (0 grader Celcius) og kjølesentrifugeres så raskt som mulig ved +4 grader Celcius. Serum bør unngåes da nivået av cytokiner, chemokiner og vekstfaktorer er høyere i serum - sannsynligvis pga. koagulasjonsaktiveringen. Fysisk aktivitet øker også komplement-aktiveringen litt og cytokinsyntese (arbeid i manuskript). Fysisk aktivitet rett før prøvetakingen bør også unngåes. Vår gruppe har tidligere undersøkt prøvetakingsbetingelser for komplementaktiveringsprodukter og et sentralt reguleringsprotein, nemlig C1-inhibitor. Vi ønsker å utføre lignende forsøk mtp. prøvetaking for analyse av cytokiner bla. Prosjektet vil kunne gi økt kunnskap om korrekt prøvetaking for en rekke potensielle nye markører for sepsis (blodforgiftning) hos mennesker. Prosjektet for også stor betydning for andre forskningsprosjekter der det analyseres cytokiner i blodprøver. Betydningen av komplement-aktivering etter prøvetakingen (pga. plast og glassvegger i prøvetakingsrørene) og koagulasjon vil bli spesielt undersøkt. Prosjektet har bidratt til en mere korrekt prøvetaking av både forsknings og rutineanalyser som skal benyttes til analyse av cytokiner, chemokiner og vekstfaktorer i bla. humant blod. Det anbefales å benytte EDTA plasma fra prøveglass som settes rett på is (0 grader Celcius) og kjølesentrifugeres så raskt som mulig ved +4 grader Celcius. Serum bør unngåes da nivået av cytokiner, chemokiner og vekstfaktorer er høyere i serum - sannsynligvis pga. koagulasjonsaktiveringen. Fysisk aktivitet rett før prøvetaklingen bør også unngåes. Prosjektet vil danne grunnlag for nye forskningsprosjektetr på mennesker ang. bruk av cytokiner, vekstfaktorer og andre biomarkører til påvisning av blodforgiftning (sepsis). Cytokiner brukes allerede som biomarkører for sepsis i enkelte land. Blodforgiftning med bakterier er fortsatt en alvorlig tilstand med høy dødelighet. Det trenges nye biomarkører til å påvise tilstanden for raskt å kunne gi korrekt antibiotikabehandling.