Effekten på chondrocytter av anti-inflammatorisk lipidmediator

Effekten på chondrocytter av anti-inflammatorisk lipidmediatorChondrocytter er brukt som modell for studien av effekten av lipidmediatorer på inflammasjon. Masteroppgave.Studien tar for seg inflammasjon i ledd med fokus på bruskcellefunksjon. Humane celler er brukt i studien og det er eicosanoiders signallering og effekt som undersøkes. For å kunne argumentere for effekt av disse på bruskceller har vi nå og tidligere undersøkt receptor uttrykk innen denne klasse molekylers kjente signalveier. Vi lyktes i å påvise to tidligere ubeskrevede receptorer uttrykt av humane bruskceller, disse receptorer binder lipidmediatorer i eicosanod-gaten.. Dette er gjort med immunmerking av både dyrkede celler og nativt vev, PCR, qPCR, flowcytometri, og signallering er påvist ved western blotting rettet mot fosforylerte intracellulære signalsubstanser som resultat av stimulering med ligand. Studien er komplisert av at disse to receptorer binder samme ligand, derfor er det nylig gjort blokkeringsforsøk hvor først den ene så den andre receptor er hemmet for å påvise individuelle forskjeller mht evne til å trigge signaltransduksjon og etterfølgende biologiske funksjon i form at produksjon av proinflammatoriske cytokiner og enzymer som bryter ned extracellulær matrix, MMPs. Vi har foreløpig kunne påvise biologisk effekt av en av disse, men ikke den andre hvilket ikke var overraskende da den ikke var kjent fra før. Til felles for begge er at det ble utført studie av kjemotaksi og celleproliferasjon uten at det ble funnet effekt av lipidmediatoren. Dette kan bety at den ikke har markant betydning i den akutte fase av inflammasjon og heller ikke regulerer leukocytt trafikk til inflammasjonsfokus. Uansett vil et slike receptoruttrykk være knyttet til en biologisk funksjon som best illustreres gjennom spesifikke blokkering forsøk hvilket vi utfører. Flere slike er studert i ettertid, dvs. etter at studien ble presentert som en masteroppgave og disse tilleggsstudier er utflørt for å øke impact av våre funn. Sammenfatning av tidligere og nye resultat pågår og publikasjon er under utarbeidelse.

Effekten på chondrocytter av anti-inflammatorisk lipidmediatorHumane bruskceller er brukt til å studere receptoruttrykkk for å kartlegge hvilke lipidmediatorer som kan brukes til å blokker inflammasjon og stimulere resolusjon.Humane bruskceller ble brukt til å studere receptoruttrykk.Vi påviste en recptor på disse cellene som ikke har vært tildligere påvist, dette var ChemR23. Denne receptor har vært påvist på leukocytter, m en altså ikke på brusk. Det viste seg at humane chondrocytter også produserte den tilhørende naturlige ligand, chemerin. Denne er et kjemokin som tiltrekker leukocytter, den produseres som pro-chemerin og aktiveres ved avspalting av pro-sekvensen, flere enzym kan spalte av og ulike isomere former av chemerin kan dannes, neo med inflammatoriske egenskaper, andre med anti-inflammatoriske egenskaper. Vi valgte å teste ut en inflammatorisk isomer, chemerin21-157 som dannes ved at neutrofile leukocytter, dvs. celler som finnes ved inflammasjon i tidlig fase, skiller ut et proteolytiske enzym som spalter av pro-sekvensen. Når cellene fikk denne chemerin isomeren, aktiviserte dette intracellulær signaltransduksjon via MAPkinase, og cellene produserte flere pro-inflammatoriske cytokiner, bla TNF og interleukiner, samt metalloproteaser. Disse forsterker inflammasjonen og deltar i destruksjon av brusk matriks. Altså har vi beskrevet en tidligere ukjent prosess hva gjelder inflammasjon i ledd, og denne prosess kan blokkeres vha lipidmediatorer, en slik er ReV1. Den binder også ChemR23, og ut fra studier gjort på leukocytter resulterer dette i demping av inflammsjonssignalering og stimulering av resolusjon. Dette fenomen tilsier at terapi kan rettes mot bruskcellene i leddet mht å redusere betennelser uavhengig om leukocytter er tilstede. Vi anser dette funn til å være av høy vitenskapelig betydning da det er genuint nye forhold vi har beskrevet, og til å være av interesse for klinisk anvendelse. Det gjenstår å påvise at lipidmediatoren virkelig har den samme effekt på brusk som på leukocytter.